布魯氏菌OMP16抗體分析

    布 魯 氏 菌 外 膜 蛋 白 （ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏ－ ｔｅｉｎ，ＯＭＰ）１６是一種與肽聚糖相關(guān)的保守性脂蛋 白，廣泛存在于布魯氏菌的６個(gè)種屬。本試驗表 達、純化出布魯氏菌 ＯＭＰ１６，并以純化的布魯氏菌 ＯＭＰ１６作為包被抗原，建立檢測布魯氏菌抗體的間 接 ＥＬＩＳＡ 法，為布魯氏菌病檢測及疫苗評價(jià)等提供 一種靈敏度高的技術(shù)方法。移液器，德國 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司；電子天平，美國 Ｄ－Ｉ－Ｃ 公司；臺式高速低溫離心機，德 國 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司；ＰＣＲ儀，北京賽百奧科技有限公 司；核酸電泳儀，美國 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司；凝膠成像儀， 上海天能科技有限公司；電熱恒溫培養箱，上海躍進(jìn)醫療器械廠(chǎng)；超聲波細胞粉碎儀，寧波新藝超聲設備 有限公司；酶聯(lián)免疫檢測儀，北京 Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司。

    目前最常用的異源蛋白表達系統是原核表達系 統，因其原核表達載體帶有篩選和純化標簽，方便了 蛋白的純化。但原核表達載體系統也存在不足之 處，會(huì )出現異源表達的蛋白與大腸埃希氏菌系統不 相容，蛋白無(wú)法表達，以及表達的重組蛋白不可溶的現象。 先 后 嘗 試 了 多 種 不 同 的 載 體，如 ｐＧＥＸ－４Ｔ－１載體，ｐＥＴ－２８ａ（＋）載體，但均出現了重 組蛋白 未 表 達 的 現 象。最 終 選 用 ｐＥＴ－３２ａ載 體， ｐＥＴ系統是目前 Ｅ．ｃｏｌｉ 表達重組蛋白最強大的系 統。ＥＬＩＳＡ 方法受多種因素的影響，首先是抗原抗 體的反應條件。根據抗原抗體反應具有特異性、比 例性、可逆性、階段性等特點(diǎn)，采用方陣滴定法篩選 抗原抗體最佳的反應條件。